201*年第一次全国临床微生物室间质评活动总结

201*年第一次全国临床微生物室间质评活动总结

201*年第一次全国临床微生物室间质评活动总结

201*年第一次全国临床微生物室间质评活动共有746个单位参加，有706个实验室寄回结果报告,40个实验室未回报结果。

表1.分离鉴定结果统计

菌号

正确结果

正确实验室数目正确百分率（%）

67696875631567718659459813

97.41.198.30.690.10.796.22.5

96.5

0.690.32.1

07-01白色假丝酵母菌（20分）

假丝酵母菌属或属内其他种（10分）其它结果(0分)

07-02脑膜炎奈瑟菌（20分）

奈瑟菌属或属内其他种（10分）其它结果(0分)

07-03类志贺邻单胞菌（20分）

邻单胞菌属（10分）其它结果(0分)

07-04肺炎克雷伯菌（20分）

克雷伯菌属或属内其他种（10分）其它结果(0分)

07-05卡他布兰汉菌（10分）

布兰汉菌属某种（5分）其它结果(0分)

07051流感嗜血杆菌（10分）

嗜血杆菌属或属内其他种（5分）其它结果(0分)

表2.0704号肺炎克雷伯菌(ESBLase+)药敏结果统计序号1抗生素名称氨苄西林阿莫西林阿莫西林/棒酸氨苄西林/舒巴坦头孢唑林头孢噻吩头孢呋辛头孢噻肟头孢曲松头孢他啶头孢他啶/棒酸头孢噻肟/棒酸

参考结果MIC(g/ml)抑菌环直径(mm)668666961822191

各实验室结果分布敏感度RRRRRRRRRRS157418I52249R53113626130448912242552520259623644头孢吡肟氨曲南亚胺配南美罗配南复方新诺明呋喃妥因环丙沙星左氧氟沙星氧氟沙星诺氟沙星庆大霉素丁胺卡那160.25>256141325613666666RRSSRRRRRRRR184627234910132121211611116422523465535974175243911061205715325678表3β－内酰胺酶结果

0705卡他布兰汉菌9β－内酰胺酶氨苄西林阿莫西林参考结果阳性RR07051流感嗜血杆菌10β－内酰胺酶氨苄西林阿莫西林参考结果阴性SS正确实验室数目43542678正确率（％）81.990.680.4正确实验室数目5119935正确率（％）94.176.270.007051流感嗜血杆菌药敏结果统计

序号11抗生素名称头孢噻肟头孢他啶头孢曲松阿莫西林/棒酸头孢克罗美罗培南亚胺培南头孢呋辛阿奇霉素红霉素1213参考结果抑菌环直径MIC(mm)(g/ml)0.125340.0163822714环丙沙星左氧氟沙星氧氟沙星复方新诺明四环素

0.030.125283422SSSSS3643051064773421410941472315鉴定结果评价

0701号标本是混合标本，根据临床症状，报告白色假丝酵母菌或白色念珠菌，霉菌性阴道炎，表皮葡萄球菌和肠球菌在此无特别的临床意义。有些实验室不能正确区分白色念珠菌和其他念珠菌，白色念珠菌因不能还原TCC，因此，在沙包弱培养基上显示白色菌落，并且在玉米吐温培养基上产生厚壁孢子，可与其他念珠菌区别。此外，霉菌性阴道炎通常由白色念珠菌引起。

0702号标本是单一菌，脑膜炎奈瑟菌，体外培养对营养要求较高，需在含有血清、血液等培养基中才能生长，常用巧克力培养基。最适温度为37℃；专性需氧，初次分离培养须提供5%～10%CO2，在巧克力培养基上经24h孵育后，形成圆形、凸起、光滑、透明似露滴状的菌落。因能产生自溶酶，超过48h常死亡。触酶和氧化酶阳性，分解葡萄糖和麦芽糖，不分解乳糖和蔗糖。此菌如果侵犯脑脊髓膜，可引起流行性脑脊髓膜炎，病人有剧烈头痛、喷射性呕吐、颈项强直等脑膜刺激症状，若抢救不及时可危及生命。患者脑脊液涂片可在中性粒细胞内找到革兰阴性双球菌。

0703号标本有临床意义的病原菌是类志贺邻单胞菌，还有肠道正常菌群阴沟肠杆菌。类志贺邻单胞菌属于弧菌科邻单胞菌属，只有类志贺邻单胞菌一个种。血平板上不溶血，菌落发灰色；氧化酶阳性可与肠杆菌科细菌区别（如沙门菌属和志贺菌属），发酵葡萄糖可与非发酵菌区别。弧菌属通常在高盐中生长，而气单胞菌属和邻单胞菌属不生长；类志贺邻单胞菌赖氨酸和鸟氨酸脱羧酶阳性，水解精氨酸可与气单胞菌属的菌相区别。

0704号标本是单一菌，肺炎克雷伯菌，部分实验室报告为克雷伯菌属内其他菌，鉴别反应不困难，产酸克雷伯菌和解鸟氨酸克雷伯菌靛基质反应阳性，而肺炎克雷伯菌靛基质阴性；其他克雷伯菌则甲基红阳性，而肺炎克雷伯菌阴性。

0705号标本是混合菌，有临床意义的是卡他布兰汉菌和流感嗜血杆菌，甲型链球菌和表皮葡萄球菌是咽部正常菌群。有3.5％实验室未分离到卡他布兰汉菌，7.7％实验室未分离出嗜血杆菌。有3个实验室报告金黄色葡萄球菌，可见凝固酶实验存在问题，应同时用质控菌株做阳性和阴性对照。

流感嗜血杆菌分离需要接种巧克力平板，5％CO2培养。12个实验室报告副流感嗜血杆菌或嗜血杆菌属。有两种方法鉴定流感嗜血杆菌，先用血平板卫星方法，确定卫星试验阳性后，做X因子，V因子和X+V因子试验；或者再做MH平板卫星试验，阴性结果可报告流感嗜血杆菌，阳性报告副流感嗜血杆菌。

药敏结果评价：

0704号标本肺炎克雷伯菌(ESBLs+)药敏结果，依据CLSI（NCCLS）标准，应对肺炎克雷伯菌，产酸克雷伯菌，大肠埃希菌和奇异变形杆菌筛选和确认ESBLs试验，头孢噻肟，头孢曲松耐药，要做确认ESBLs试验，头孢噻肟/棒酸和头孢噻肟抑菌环直径之差>5mm，报告产ESBLs，所有青霉素类，头孢菌素类和氨曲南报告耐药。有27个实验室头孢他啶报告敏感或中介度；29个实验室报告头孢吡肟敏感或中介度；10个实验室报告氨曲南敏感或中介度。

0705号标本

临床上对流感嗜血杆菌、淋病奈瑟菌和卡他布兰汉菌常规应检测β-内酰胺酶，可以快速报告，指导临床用药。

β－内酰胺酶结果：

卡他布兰汉菌结果（阳性）正确率为94％，流感嗜血杆菌（阴性）正确率82％，偏低。流感嗜血杆菌的纸片法药敏试验对培养基要求是专用HTM培养基，在MH培养基中加入氯化血红素、NAD和酵母粉（配制方法见NCCLS标准），5%CO2培养。

卡他布兰汉菌201*年CLSI（NCCLS）有稀释法的标准了。没有推荐常规做药敏实验，主要用于流行病调查，和长期治疗或严重感染患者。多数卡他布兰汉菌产β－内酰胺酶，对氨苄西林和阿莫西林耐药。稀释法药敏抗生素包括：阿莫西林/棒酸，头孢克罗，三代头孢菌素，阿奇霉素，克拉霉素和红霉素；环丙沙星，左氧氟沙星，四环素，克林霉素，复方新诺明，氯霉素和利福平。

卫生部临床检验中心

微生物室201*.04.20

扩展阅读：201*年第一次全国临床微生物室间质评活动总结

201*年第一次全国临床微生物实验室间质评回报总结

201*年第一次全国临床微生物室间质评活动总结

201*年第一次全国临床微生物室间质评活动共有885个单位参加，有852个实验室按照规定时间结果报告,现对按时上报结果进行总结。

菌号

100110021003100410051005-1

表1.分离鉴定结果统计正确结果正确实验室数目正确百分率（%）未检出致病菌(20分)1201*.2金黄色葡萄球菌（不扣分）71384.3小肠结肠炎耶尔森菌(20分)83398.1耶尔森菌属内其他种(非高致病菌)(10分)50.6杜克雷嗜血杆菌(20分)72084.9嗜血杆菌属及属内其他种（10分）141.6坂崎肠杆菌(20分)83998.9阴沟肠杆菌（10分）30.4嗜水气单胞菌(10分)83398.2气单胞菌属内其他菌（5分）60.7化脓性链球菌或A群链球菌(10分)78198.0β-溶血链球菌其他血清群(5分)50.6链球菌属及草绿色链球菌群(5分)81.0

表2.1004号坂崎肠杆菌药敏结果统计抗生素名称庆大霉素头孢他啶头孢曲松头孢噻肟头孢吡肟亚胺培南

序号12参考结果MIC(g/ml)0.1250.1250.1250.094抑菌环直径(mm)25323131敏感度SSSSSSS各实验室结果分布I140210R12021134751732367579758777表3.1005号嗜水气单胞菌药敏结果统计序号567

1

卫生部临床检验中心微生物室201*.4.22

抗生素名称头孢吡肟/头孢曲松复方新诺明左氧氟沙星环丙沙星参考结果MIC(g/ml)0.1250.0940.0030.004抑菌环直径(mm)34294040敏感度SSSSSS各实验室结果分布I33702R1013107253396496256201*年第一次全国临床微生物实验室间质评回报总结

表4.1005-1号A群链球菌（化脓链球菌）药敏结果统计序号8910

抗生素名称青霉素G/氨苄西林红霉素/克林霉素万古霉素参考结果MIC(g/ml)0.0080.0160.0230.0320.5抑菌环直径(mm)3840312824敏感度SSSSSS各实验室结果分布I21691R951562663401684668733鉴定结果分析

1001号咽试子标本咽部肿痛青年患者，分离出金黄色葡萄球菌和副流感嗜血杆菌。有84.3%（713/846）实验室报告金黄色葡萄球菌，9个实验室报告嗜血杆菌。

多数咽部感染患者都是由于呼吸道病毒引起，由细菌引起感染占5-40%。A群β-溶血链球菌（化脓链球菌）是引起咽峡炎最常见的致病菌。其他C群和G群β-溶血链球菌也可以经食源性引起咽峡炎爆发，但不像A群链球菌那样引起严重的免疫系统疾病。

肺炎链球菌和嗜血杆菌属有时可在咽部标本中分离到，但这些菌不大可能是引起普通咽峡炎的病原菌，如副流感嗜血杆菌。嗜血杆菌定植在健康人的上呼吸道，在咽部标本培养分离到时，实验室不应常规报告嗜血杆菌，这样会引起混淆和导致临床医生不必要的治疗。

咽试子细菌培养常规只检测化脓链球菌，除非医生特殊需要，如在诊断白喉时。溶血隐秘杆菌（Arcanobacteriumhaemolyticum）也可引起咽炎和扁桃体化脓。

b型流感嗜血杆菌和偶尔由金黄色葡萄球菌或肺炎链球菌引起的会厌软骨炎可迅速发展为蜂窝织炎，可造成气道阻塞。咽试子培养对确定此类感染的病原菌有意义。

1004号标本应报告“未检出致病菌”。只有122个实验室正确报告。金黄色葡萄球菌在下呼吸道感染中有临床意义，因标本操作和报告流程尚未统一，这次咽试子培养报告“金黄色葡萄球菌”不扣分。

1002号腹泻患者便标本培养分离出小肠结肠炎耶尔森菌和大肠埃希菌，报告有临床意义的小肠结肠炎耶尔森菌，有5个实验室种鉴定错误，报告耶尔森菌属内其他种(非高致病菌)。

2

卫生部临床检验中心微生物室201*.4.201*年第一次全国临床微生物实验室间质评回报总结

1003号阴茎溃疡试子标本分离出杜克雷嗜血杆菌（Haemophilusducreyi）和表皮葡萄球菌，后者是皮肤污染菌。84.9%（720/848）实验室正确分离、鉴定和报告杜克雷嗜血杆菌，有14个实验室报告其他嗜血杆菌，5个实验室报告淋病奈瑟菌，87个实验室报告表皮葡萄球菌，10个实验室报告其他葡萄球菌，21个实验室报告“未检出致病菌”。

淋病奈瑟菌、沙眼衣原体和杜克雷嗜血杆菌肯定是生殖系统的致病菌，而肠杆菌科、金黄色葡萄球菌和B群链球菌只在某些临床情况下作为致病菌（条件致病菌）。

杜克雷嗜血杆菌是革兰阴性小杆菌，引起性传播疾病外生殖器软下疳。杜克雷嗜血杆菌分离条件：5%CO2气体培养，最适生长温度33℃培养3-4天，血平板上可生长，巧克力平板生长更好。与其他嗜血杆菌区别：生长需X因子，不需要V因子，其他嗜血杆菌生长需要V因子，不需X因子，流感嗜血杆菌和埃及嗜血杆菌生长需要X+V因子；不溶血与溶血嗜血杆菌区别；杜克雷嗜血杆菌氧化酶阳性，触酶阴性，吲哚阴性，SPS敏感，碱性磷酸酶阳性；而阴道加德纳菌是氧化酶阴性，触酶阴性。此外，标本来源也作为判断报告杜克雷嗜血杆菌的重要依据。

很多实验室培养分离不到杜克雷嗜血杆菌，可能与培养基质量、培养温度及培养环境气体等因素有关。

1004号婴儿菌血症标本，血培养阳性，生长坂崎肠杆菌（Enterobactersakazakii）。98.9%（839/848）实验室正确分离和鉴定。

临床意义：坂崎肠杆菌是条件致病菌，食源性传播，引起新生儿脑膜炎、坏死性小肠结肠炎、败血症、脑脓肿、脑梗塞等散发和爆发病例，特别是早产儿，免疫系统弱的新生儿，新生儿死亡率为40-80%。

坂崎肠杆菌对常规灭菌方法耐受，如不易穿透、耐热、耐干燥压力。在婴儿配方奶粉中可长期存活，还可在4℃冷藏冰箱中繁殖；可形成生物膜(biofilms)可抵御消毒剂(CatherineJ.Hunter.Enterobactersakazakii:AnEmergingPathogeninInfants

andNeonates.SurgInfect(Larchmt).201*October;9(5):533539.)。

坂崎肠杆菌生化反应与阴沟肠杆菌非常相似，可通过菌落产黄色区分。

1005号标本伤口试子，分离出化脓链球菌和嗜血气单胞菌，这两种菌都是引起伤口感染的病原菌。

3

卫生部临床检验中心微生物室201*.4.201*年第一次全国临床微生物实验室间质评回报总结

气单胞菌属有14个种，只有豚鼠气单胞菌、嗜水气单胞菌、简氏气单胞菌(A.

jandaei）、舒氏气单胞菌(A.schubertii)和维氏气单胞菌(A.veronii)五种目前认为可引

起人类各种感染，包括：胃肠炎、蜂窝织炎和菌血症。还有溶血尿毒症、烧伤相关败血症和各种呼吸道感染，包括会厌软骨炎。临床标本中有3种菌呈分离优势菌：嗜水气单胞菌、豚鼠气单胞菌和维氏气单胞温和生物型(A.veroniibiotypesobria)。嗜水气单胞菌V-P试验和赖氨酸脱氢酶阳性，水解七叶苷阳性可与豚鼠气单胞菌和其他气单胞菌区别。

化脓链球菌正确分离和鉴定实验室占上报实验室的92.5%(788/852),有些分离到的实验室鉴定为无乳链球菌或不能血清分群，还有实验室报告草绿色链球菌群。首先血平板的质量影响到化脓链球菌的生长，羊血质量关系到是否产生透明溶血环，确定是β-溶血链球菌后，用杆菌肽纸片敏感判断是化脓链球菌，还可用β-溶血链球菌分型血清确认，CAMP试验阳性是无乳链球菌，鉴别并不困难。血平板所用羊血如果贫血，则看不到典型的透明溶血环，可能是草绿色溶血，就会导致错误的判断。纠正措施：应该用肺炎链球菌和化脓链球菌做每批次的血平板质控，如果能生长并有典型菌落和溶血性，血平板才合格，可用于接种临床标本。

药敏评价

1004号标本坂崎肠杆菌典型的坂崎肠杆菌治疗用氨苄西林和庆大霉素。为了防止可能的坂崎肠杆菌耐药性增加，医生也会考虑用卡巴配能类和头孢吡肟与氨基糖苷类联合治疗，但标准推荐最小使用广谱抗生素原则，还是要依据培养和药敏结果用药。研究者通过对各种坂崎肠杆菌株的抗菌谱调查，发现野生群坂崎肠杆菌株没有对头孢菌素天然耐药，并且这些菌株缺少β-内酰胺酶。象其他肠杆菌科菌株一样，坂崎肠杆菌对林可霉素类,糖肽类、链阳霉素(streptogramins)、梭链孢酸(fusidicacids)天然耐药。

因此，这株菌是典型的敏感菌株。很多使用专家系统的实验室依据系统对氨苄西林、第一、二代头孢菌素敏感结果进行了修正，可能是依据通常肠杆菌属细菌的耐药谱特征。这次活动对氨苄西林、第一、二代头孢菌素结果不计分。

1005号混合感染标本嗜水气单胞菌，依据CLSI“不常见和苛养菌药敏标准(M45-A)”,初级试验和报告：阿莫西林/棒酸，氟喹诺酮类、复方新诺明、第三、四

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卫生部临床检验中心微生物室201*.4.201*年第一次全国临床微生物实验室间质评回报总结

代头孢菌素。嗜水气单胞菌、豚鼠气单胞菌和维氏气单胞温和生物型是临床标本中最常分离的气单胞菌，大多数文献的药敏试验都是局限在这3种菌。邻单胞菌属只有一个种：类志贺邻单胞菌，药敏结果解释原来是归在肠杆菌科，因其表型与气单胞菌属相似，致病谱也相似，因此药敏折点判断归在气单胞菌指南。肠道外分离的气单胞菌需要做药敏试验。气单胞菌药敏解释标准见附表。

1005-1号标本化脓链球菌药敏结果解释在CLSI需氧菌药敏折点判断标准中(M100-S20)的β-溶血链球菌群，药敏用5%羊血MH平板，质控菌株为ATCC49619肺炎链球菌。青霉素或氨苄西林、头孢吡肟或头孢噻肟或头孢曲松、万古霉素有纸片扩散法和MIC法折点标准，厄他培南、美罗培南、达普托霉素只有MIC法折点标准，因尚未发现或极少出现对这些抗生素耐药的β-溶血链球菌，因此只有敏感判断折点。注意：

1.纸片法检测肉眼观察完全抑制的抑菌环，没有明显可见的受试菌生长的边缘为抑菌环端点。用反射光读取抑菌环结果，光源在平皿上方。若用放大镜观察抑菌环，忽略边缘生长非常微弱的菌落。

2.CLSI/M100-S20文件中β-溶血链球菌群包括大菌落的A群（化脓链球菌）、C群、G群和B群（无乳链球菌），小菌落β-溶血链球菌的A群、C群、F群或G群抗原（咽峡炎链球菌群，之前也称米勒链球菌,即S.milleri）被放到草绿色链球菌群，药敏结果解释用草绿色链球菌群判定折点。

3.化脓链球菌和无乳链球菌无需向临床常规报告青霉素和其他β-内酰胺类抗生素药敏结果，如果发现不敏感菌株，应送往参考实验室。

附件：201*年CLSI需氧菌药敏主要变更内容（稍后可在网上下载）

提示：201*年全国微生物质评大会拟9月中旬在杭州召开，届时正式通知请关注

Clinet网。

卫生部临床检验中心微生物实验室

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卫生部临床检验中心微生物室201*.4.

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